文章目录
1 材料与方法
1.1 主要试剂与仪器
1.2 at RA-NE的表征研究
1.2.1 at RA-NE的制备
1.2.2 粒径及Zeta电位检测
1.2.3 透射电镜（TEM）检测
1.2.4 扫描电镜（SEM）检测
1.2.5 包封率与载药量测定
1.3 测at RA-NE刺激小鼠BMDC成熟能力
1.3.1 at RA-NE促BMDC细胞成熟能力
1.3.2 at RA-NE促进淋巴细胞表面CCR9分泌
1.4 小鼠免疫与样本采集
1.5 注射部位急性炎症的表征
1.6 血清中OVA特异性Ig G、Ig G1、Ig G2a的检测
1.7小肠灌洗液中OVA特异性Ig A的检测
1.8 脾淋巴细胞培养上清中IL-4、IL-17的检测
1.9 ELISPOT测脾淋巴细胞分泌IFN-γ的水平
2 结果
2.1 at RA-NE的表征
2.2 体外刺激淋巴细胞成熟与分化的情况
2.3 免疫后注射部位IL-6和IL-15的表达水平
2.4 免疫后小鼠血清中特异性抗体Ig G及其亚型水平
2.5 肠黏膜部位抗原特异性s Ig A水平
2.6 免疫后小鼠脾细胞分泌细胞因子的情况
3 讨论
文章摘要:目的制备装载全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,atRA)的纳米乳佐剂,评价其黏膜佐剂效应。方法使用低能乳化法制备包裹有维甲酸的纳米乳,利用动态光散射仪、扫描电子显微镜、透射电子显微镜等对其理化性质进行表征;与BMDCs、脾淋巴细胞或肠系膜淋巴结细胞共孵育后用流式细胞术检测其促淋巴细胞成熟和分化的能力;小鼠肌注给药后,表征其诱发注射部位急性炎症情况;ELISA检测脾淋巴细胞分泌IL-4、IL-17A等细胞因子的表达水平以及血清与肠黏膜部位抗原特异性抗体的滴度,初步评价维甲酸纳米乳作为黏膜疫苗佐剂的效应。结果成功制备了平均粒径27.23 nm,Zeta电位-25.8 mV,装载0.998 mg/ml全反式维甲酸的纳米乳,与抗原物理混合后通过肌肉注射免疫小鼠,在注射部位诱导了与铝佐剂相当的IL-6与IL-15的水平,形成了有利于免疫响应的炎症微环境,在诱导高水平血清抗原特异性IgG的同时,在肠黏膜部位还诱导了高水平的抗原特异性sIgA抗体。结论维甲酸纳米乳具有良好的黏膜佐剂活性,肌肉注射后可激活体液与肠黏膜抗原特异性抗体应答,为后续研究通过肠道入侵人体病原体的疫苗提供新思路。
文章关键词:全反式维甲酸,肠黏膜免疫,IgA,OVA,
项目基金:国家自然科学基金项目（31670936）,
论文作者:金喆 冒灵 刘畅 刘婧怡 薛若怡 冯壤 李郭成 金滋力 孙红武 邹全明 李海波
论文DOI: 10.13431/j.cnki.immunol.j.20210115
论文分类号: R392-33
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文章来源：现代检验医学 网址: http://xdjyyx.400nongye.com/lunwen/itemid-91112.shtml
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